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產品名稱:

293T(人胚腎細胞)

產品廠地: 上海市
訪問次數: 1090
更新時間: 2021-03-04
描述:巨噬細胞炎性蛋白5(MIP-5)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :MIP-5 ELISA Kit,英文縮寫:MIP-5,

膠質細胞系來源的神經營養因子(GDNF)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :GDNF ELISA Kit,英文縮寫:GDNF,

激肽釋放酶11(KLK 11)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :KLK 11 ELISA Kit,英文縮寫:KLK 11,

肌球蛋白輕鏈(MLC)

產品介紹

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操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內,稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內,在37℃、5%co2及飽和濕度下培養。
1.2.2 細胞傳代 原代培養的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數,按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液=(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數后分別接種于12個25cm2培養瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ,計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養基。每天隨機取3孔,計數每孔細胞的數目并計算平均值。連續計數10d,繪制細胞生長曲線。

在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。

產品名稱

 293T(人胚腎細胞)

規格

5×106cells/瓶

貨號

 BK-X87414

產品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩定劑,提取的蛋白穩定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。

培養:
1.取出小鼠后瀝干酒精,放入超凈臺內,固定在泡沫板上。
2.用鑷子提起皮膚,用解剖剪剪開皮膚一個橫切口,將皮膚向上撕開,然后剪開肌肉等,暴露出腹腔,在左側找到脾臟,用彎頭眼科鑷取出脾臟,置于無菌培養皿中。
3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次,并剔除多余無用的組織。
4.將篩網置于平皿中,脾臟置于篩網上,用彎頭鑷鑷住,輕輕在篩網上進行碾磨,同時不停滴加不含血清的培養液沖洗。
5.將碾磨好的細胞懸液吸入至離心管中,離心(1000rpm,5min),吸去上清(去除血液等)。
6.加入10ml培養液,吹打混勻,取樣計數。
7.將稀釋好的細胞懸液分裝于培養瓶中,輕輕搖晃混勻,在培養瓶上。
實驗事項:
1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。  實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2.   加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的“預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內,如標本數量多,推薦使用多道移液器加樣。
3.   孵育:為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發;洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4.   洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數。
5.  試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6.  反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請提前加入終止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7.  底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。
    建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。
    如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數。

EC-MUG培養基(100g)  100g

MUG營養瓊脂(NA-MUG培養基)  250g

MUG營養瓊脂 MUG Nutrient Agar 100g

腸球菌顯色培養基  1000ml

MEI培養基 MEI Medium 1000ml

念珠菌顯色培養基 Candida Chromogenic Medium 1000ml

大腸桿菌/大腸菌群液體顯色培養基 E.Coli/Coliform Broth Chromogenic Medium 1000ml

MUGal肉湯 MUGal Broth 100g

細菌總數顯色培養基(不含瓊脂)  250g

蠟樣芽孢桿菌顯色培養基(第三代)  1000ml

即用型平板培養基  

酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂(YPD)平板  9cm*10/包

血平皿(9cm) Blood Agar Plates 無

哥倫比亞血瓊脂平板(9cm) Columbia Blood Agar 5個/包

293T(人胚腎細胞)巨噬細胞炎性蛋白5(MIP-5)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :MIP-5 ELISA Kit,英文縮寫:MIP-5,

膠質細胞系來源的神經營養因子(GDNF)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :GDNF ELISA Kit,英文縮寫:GDNF,

激肽釋放酶11(KLK 11)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :KLK 11 ELISA Kit,英文縮寫:KLK 11,

肌球蛋白輕鏈(MLC)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :MLC ELISA Kit,英文縮寫:MLC,

核因子κB受體活化劑配體(RANKL)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :RANKL ELISA Kit,英文縮寫:RANKL,

骨退化特異標志物(CTX-2)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :CTX-2 ELISA Kit,英文縮寫:CTX-2,

高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :U-TSH ELISA Kit,英文縮寫:U-TSH,

鈣聯蛋白(calnexin)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :calnexin ELISA Kit,英文縮寫:calnexin,

泛素分解酶(DUB)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :DUB ELISA Kit,英文縮寫:DUB,

凋亡相關因子(Fas)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :Fas ELISA Kit,英文縮寫:Fas,

蛋白二硫化物異構酶前體(PDI)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :PDI ELISA Kit,英文縮寫:PDI,

促性腺激素釋放激素(GnRH)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :GnRH ELISA Kit,英文縮寫:GnRH,

腸三葉因子(ITF)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :ITF ELISA Kit,英文縮寫:ITF,

表皮細胞活化肽因子(CAPF)elisa檢測試劑盒 英文名稱 :CAPF ELISA Kit,英文縮寫:CAPF,

 

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